jueves, 26 de marzo de 2015

Técnica 3. Electroporación.

Los protoplastos son células de cualquier tejido vegetal a las que se les ha liberado de la pared celular que es la barrera que impide el paso de grandes moléculas como el ADN. Para obtener protoplastos, el tejido vegetal debe ser incubado en un medio de digestión con enzimas pectocelulolíticas, como las que digieren la celulosa, las hemicelulosas y las pectinas, que son los principales constituyentes de las paredes celulares. Por medio de un electroporador se inducen poros reversibles en las membranas celulares, que permiten el pasaje de iones y moléculas.


La mayoría de los electroporadores utilizan descargas de alto voltaje La intensidad del pulso está determinada por el voltaje aplicado y la conductividad del medio. El grado de permeabilidad de la membrana, por su parte, depende del campo eléctrico aplicado y del tipo celular. Altos niveles de permeabilidad facilitan la entrada del ADN, pero disminuyen la viabilidad de las células. Por este procedimiento se han conseguido cultivos transgénicos de arroz, soya, cítricos, fresa, maíz o tabaco.

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